Teste Genético

Perguntas Frequentes sobre Teste Genético

Este diagrama em árvore de decisão mostra como é realizado o teste genético do FSHD. (Referência: University of Iowa)

Abrafeu - Associação facio escapulo umeral

O teste genético para FSHD1 consiste em medir o tamanho do segmento de DNA contendo várias repetições de sequências de DNA idênticas chamadas D4Z4. Tesouras moleculares (enzimas de restrição chamadas EcoRI e Blnl) são usadas para cortar o DNA em ambos os lados das repetições, e os fragmentos do cromossomo 4 são dimensionados. Em indivíduos saudáveis, ambas as cópias do cromossomo 4 terão mais de 10 repetições de D4Z4, enquanto que em indivíduos com DFEU, uma cópia do cromossomo 4 terá apenas entre uma e 9 repetições. Esse cromossomo encurtado ou “contraído” deve ser combinado com um local de poliadenilação 4qA “permissivo” para que a pessoa tenha DFEU.

O relatório do teste genético fornece dois números, um de cada cópia do cromossomo 4, correspondente ao tamanho da região D4Z4, medido em “kilobases”. Se a região D4Z4 tiver mais de 50 kilobases (> 13 repetições), isso será faixa saudável. Entre 39 e 50 kilobases (10-13 repetições) é considerado “limítrofe”. Considera-se FSHD1 menor ou igual a 38 kilobases (1-9 repetições). (Referência: University of Rochester Medical Center.)

O teste genético para FSHD2 consiste em medir os níveis de metilação na região D4Z4 no cromossomo 4. Recentemente, os pesquisadores encontraram mutações em um gene chamado SMCHD1 em aproximadamente 80% dos pacientes com FSHD2. Mais de 52 mutações no SMCHD1 foram encontradas em pacientes com FSHD2.

O DNA é isolado dos glóbulos brancos. Um único tubo de sangue (cerca de uma colher de sopa) fornece DNA suficiente para realizar o teste. O DNA também pode ser obtido da saliva.

Você pode pedir ao seu médico para encaminhá-lo à sua clínica de genética local. Lá, será feita uma história familiar detalhada. O geneticista será capaz de identificar os indivíduos da sua família que podem se beneficiar mais com o teste de DNA. O geneticista também poderá providenciar a coleta e a remessa de sangue para um centro de testes.

Os resultados dos testes de DNA são relatados ao médico responsável (geralmente um geneticista). Como os resultados dos testes de DNA podem ser difíceis de interpretar e entender, é essencial que um profissional qualificado, como um geneticista, explique os resultados dos testes de DNA.

FSHD esporádico significa que um único indivíduo em uma família tem FSHD, mas mais ninguém na família apresenta sintomas. Isso também significa que a exclusão do FSHD foi identificada no indivíduo afetado, mas não em seus pais. Depois que alguém é diagnosticado com FSHD esporádico, o risco de transmitir FSHD é o mesmo que na forma herdada de FSHD. FSHD herdado significa que a doença está presente em vários membros da família por duas ou mais gerações.

Os indivíduos com FSHD têm 50% de chance de ter um filho com FSHD em cada gravidez.

Adaptado de Marsha Speevak, PhD, Laboratório de Diagnóstico Molecular, Departamento de Genética
Hospital Infantil de Eastern Ontario, Ontário, Canadá
FSH Watch, vol. 5 nº 1, primavera de 1998 [alterada em janeiro de 2014]

Um excelente artigo publicado na revista Chromosoma e em co-autoria de Melanie Ehrlich, Ph.D., da Universidade Tulane, e Richard Lemmers, Ph.D., do Centro Médico da Universidade de Leiden, Leiden, na Holanda, introduz melhorias nos testes genéticos. e educação em testes genéticos para FSHD. Seu artigo contém uma das melhores representações de um gráfico mostrando um fluxograma dos procedimentos recomendados para o diagnóstico molecular de FSHD. O artigo ilustra “a complexidade inerente ao diagnóstico molecular de FSHD devido à homologia 4q e 10q entre matrizes D4Z4 e sequências adjacentes, translocações entre matrizes 4q e 10q D4Z4, contrações mitóticas de D4Z4, deleções que englobam p13E-11 e a ampla variedade de tamanhos de D4Z4 matrizes combinadas com a necessidade de alta resolução de bandas na faixa de 30 a 45 kb. ”Eles também aprimoram o teste genético FSHD. “Uma vantagem importante do uso de uma sonda D4Z4 para o diagnóstico molecular de FSHD em conjunto com a sonda p13E-11 é que ela permite a identificação de cerca de 3% dos pacientes com FSHD que têm uma exclusão da sequência genômica do p13E-11 ao lado de um curto período 4q Matriz D4Z4 (Lemmers et al. 2003). ”

O artigo é uma excelente visão geral da genética complexa de ponta do FSHD. Em particular, a figura 6 na página 114 possui um fluxograma para o diagnóstico molecular do FSHD. O diagrama mostra cenários de teste para confirmação do FSHD clínico e exclusão para provar clinicamente nenhum FSHD. Muito obrigado aos drs. Ehrlich e Lemmers e co-autores desta melhoria significativa nos testes genéticos para FSHD, além de fornecer materiais e documentação de como funciona o teste genético de FSHD.

Cromossomo. Abril de 2007; 116 (2): 107-16. Análise de hibridação de matrizes de repetição D4Z4 ligadas ao FSHD. Ehrlich M, Jackson K, Tsumagari K, Camaño P, Lemmers RJ. Abstrato.

Para baixar o fluxograma de diagnóstico reimpresso com a permissão dos autores, clique aqui

A FSHD Society recebe inúmeras perguntas sobre como entender os resultados dos testes genéticos.

Os seguintes trechos são de Deymeer F (ed): Doenças Neuromusculares: Dos Mecanismos Básicos ao Manejo Clínico. Clin Neurosci. Basel, Karger, 2000. vol 18. pp 44-60. O título do capítulo “Distrofia Muscular Facioscapulohumeral: Aspectos Diagnósticos e Moleculares” é de Peter Lunt, Ph.D., Unidade de Genética Clínica, Bristol Royal Hospital for Sick Children, Bristol, Reino Unido.

As páginas 48-49 têm uma seção intitulada “Teste Molecular: Confirmação de Diagnóstico”, que declara: “Em 90-95% dos casos de FSHD, conforme definido por atender aos critérios de diagnóstico, o diagnóstico pode ser efetivamente confirmado mostrando a presença de um fragmento de DNA encurtado (<35 kb) em 4q35 (reconhecido pela sonda pl3E-11), que surge da exclusão de um número integral de cópias das repetições de 3,3 kb dessa região. A sonda de DNA usada (pl3E-11) também detecta a matriz de repetição intimamente homóloga de 3,3 Kb de 10q26. No entanto, cada repetição do tipo cromossomo 10 tem um local de restrição BlnI adicional. Para o teste de diagnóstico específico, uma digestão dupla com EcoRi / BlnI é empregada no DNA genômico (obtido do sangue periférico), que remove as repetições do tipo cromossomo 10, mas deixa intactas as repetições do tipo cromossomo 4 (ainda que reduzidas em 3 kb em comparação com o tamanho). para digestão única EcoR1) {Fonte: Doenças Neuromusculares: Dos Mecanismos Básicos ao Manejo Clínico.

A página 45 do capítulo define a correlação geralmente aceita entre a gravidade clínica e o cálculo do número de repetição D4Z4. “Verificou-se que a idade de início e a gravidade da apresentação clínica se correlacionam ampla e inversamente com o tamanho do fragmento de DNA residual no 4q35 e, por inferência, se correlacionam diretamente com o número de unidades de repetição excluídas. Assim, os menores comprimentos de fragmentos residuais entre 10 e 17 kb (1-3 cópias repetidas) geralmente estão associados a uma apresentação infantil ou infantil grave, comprimentos médios (18 a 30 kb ou 4-7 cópias repetidas) são freqüentemente encontrados nas maiores famílias dominantes reconhecidas, enquanto os maiores comprimentos (31-38 kb ou 8-10 cópias repetidas) foram associados a uma apresentação predominantemente escápulo-umeral mais suave e podem muito bem ter penetrância reduzida, principalmente em mulheres. Novos casos de mutação são observados predominantemente com os menores comprimentos de fragmentos residuais, dando severidade clínica correspondente, e podem se originar predominantemente na cópia materna do cromossomo 4. O estudo do DNA dos pais sugere que cerca de 20 a 30% das novas mutações ocorrem como eventos somáticos e germinativos em um dos pais, isso geralmente também é a mãe. ”

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